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微生物培養基種類與用途|滋養培養基、選擇培養基、區別培養基完整介紹

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GMP Grade 細胞因子與重組蛋白
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文章摘要

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【培養基種類】

培養基可依照其應用的目的或功能,分為下列數種

各種臨床微生物之營養需求彼此不同,但所有微生物均須碳、氮素源及微量元素,培養基微實驗室供應微生物生長的物質;如已知 培養基成分者,稱為合成培養基(chemically defined or synthetic medium);而成分不完全知曉者,稱為非合成培養基(non-synthetic medium)。微生物檢驗所使用的培養基都屬於後者,除非特殊的實驗或研究項目才能使用合成培養基。某些微生物在簡單化學組成(僅含氮或硝酸鹽)之培養 基即能生長,但另些需要培養基含有較複雜之蛋白質水解物-蛋白腖(peptone)作為氮素源才能生長。大多數臨床微生物須提供較複雜化合物才能生長良好。

培養基可依照其應用的目的或功能,分為下列數種

一、滋養培養基(Enriched media)

培養基加入特殊養分如血液,血清或動植物抽出液體,而能提供挑剔性細菌的生長,如 blood agar plate (BAP,血瓊脂平板)即為此類培養基,能支持 Streptococcus pneumoniae (肺炎鏈球菌)的生長。又如 Brucella agar (布魯氏菌瓊脂)(或AnBAP)能支持厭氧的生長, chocolate agar (巧克力瓊脂)能支持 Haemophilus influenzae (流感嗜血桿菌)的生長。其它滋養培養基如 tryptic soy agar (TSA,胰蛋白酶大豆瓊脂),tryptic soy broth(TSB,胰蛋白酶大豆肉湯), TGEA , plate count agar (PCA,平板計數瓊脂),nutrient agar(NA,營養瓊脂),LB agar,Mueller-Hinton (M-H) agar 等。

二、選擇培養基(Selective mediag)

培養基加入某種特殊化學物質,能阻止一群(group)細菌的生長,但不影響另一群細菌的繁殖。例如 eosin methylene blue medium (EMB,伊紅美藍培養基)及 MacConkey medium(麥康凱培養基)能讓革蘭氏陰性桿菌〔如 Escherichia coli(大腸桿菌)〕生長,但抑制革蘭氏陽性球菌(如葡萄球菌)。又如一些含抗生素的分離培養基(如 CAN)能選擇性的抑制某些微生物(腸內菌)生長, 但能讓特定微生物(葡萄球菌)生長良好。

三、區別培養基(Differential media)

培養基中含有某種特殊化學物質,使能在其生長的各種細菌顯出不同的特性,例如 MceConkey medium(麥康凱培養基)生長的乳糖發酵性革蘭氏陰性桿菌呈粉紅色菌落, EMB agar 呈深紫色或藍黑色,而乳糖非發酵性在兩者則呈無色菌落。事實上, MacConkey(麥康凱)及 EMB agar 除了作為區別性培養基外,亦是選擇性培養基,因革蘭氏陽性球菌不能在其上生長。又如不同種(species)的鏈球菌在 BAP 上呈現不同的溶血型 式,因此 BAP 可區分溶血性和非溶血性細菌,所以 BAP 同時是滋養培養基,也是區別性培養基。

四、增數菌培養基

培養基中含特殊的成分適合所欲分離的菌種生長,而不適合他種細菌生長,增數培養基通常用於分離檢體所含各菌種中數目較少生長較慢的菌種,例如: GN broth , Selenite brilliant green broth (亞硒酸鹽皇綠肉湯)用於糞便檢體的微生物檢查,能夠鼓勵 Salmonella (沙門氏菌)(通常在病人檢體中數目僅佔少數,生長亦較常在菌 慢)之生長而抑制常在菌如 E.coil (大腸桿菌)之生長。又如 alkaline peptone water (鹼性蛋白胨水)能讓霍亂弧菌生長而增加數目,而其它細菌在此高 pH 值的培養基則生長不佳。

五、鑑定細菌特性用培養基

碳水化合物發酵試驗培養基:

例如: bromocresol purple broth w/1% lactose (溴甲酚紫肉湯/1%乳糖),能測定微生物是否能發酵 lactose (乳糖)(由紫色變黃色)及產色氣體〔Durham tube(杜蘭管)含氣泡〕。其它如 CTA w/1% carbohydrate (碳水化合物), phenol red broth w/1% carbohydrate (酚紅肉湯/1% 碳水化合物), Andrade’s broth w/1% carbohydrate , O/F broth w/1% carbohydrate 等。

基質利用試驗(Substrate utilization test)培養基:

例如: Simmon citrate agar (檸檬酸鹽瓊脂)能決定細菌是否能利用 citrate (檸檬酸鹽)為唯一碳素源(由綠色變藍色),又 acetate agar (醋酸鹽瓊脂)能決定細菌是否能利用 acetate (醋酸鹽)為唯一碳素源(由綠色變藍色)。

酵素生能力試驗(Enzyme-producing ability)培養基:

例如: DNase 試驗培養基能決定細菌是否能產生 deoxyribonuclease (DNase,去氧核醣核酸酶),又如 Christensen urea agar (克氏尿素瓊脂)能決定細菌是否能分泌 urease (尿素酶)(由黃色變粉紅色), Qrnithine (烏氨酸)或 Lysine decarboxylase medium (賴氨酸脫羧酶培養基)能測定是否產生此氨基酸酵素。

測定特殊代謝產物培養基:

例如 methyl red (甲基紅)為測定細菌是否能發酵葡萄糖產生大量酸性代謝物(使培養基 pH 降至 4.5 以下)。又如 VP 培養基,為測定細菌是否能發酵葡萄糖產生代謝中間物 acetylmethylcarbinol (acetoin,乙醯甲基甲醇)。

運動性試驗培養基:

例如: motility test medium (運動性試驗培養基)穿刺接種細菌後,能根據在培養基生長括散的現象,決定該菌是否具有運動性。

產色素瓊脂(Chromogenic agar):

如針對各種病原菌的系列 CHROMagar ,不同微生物生長在培養基上時會顯現出其特殊的顏色。

六、保存及攜送培養基

保存某一純培養菌之活性及生理特性所使用的培養基,例如 stock medium (庫存培養基)可作為保存一般腸內桿菌,而 GermBank 保存裝置(啟新生技生產)能保存各種致病菌。

臨床檢體的攜送,必須做到其中的微生物在接種培養基前不增殖或數目減少,並使各種微生物數量維持一定的比率。因此,有些檢體,尤其是病原微生物數量很低的檢 體,必須使用攜送培養基,以達到分離的效果。例如:由咽喉、鼻腔、耳、眼、直腸、傷口等處收集的棉花拭子檢體,要置於攜送培養基中,常用之攜送培養基包 括:

  • Aerobic CultureSwab(含 Stuart 培養基、Amies 培養基、或 CaryBlair 培養基)係針對分離嗜氧菌而設計;

  • Anaerobic CultureSwab 或 Anaerobic Transtube,培養基與 Culture-Swab 成分相同,但量較多,係針對分離厭氧菌而設計;

  • Buffered glycerol-saline base 係針對分離糞便中志賀氏菌(Shigella spp.)而設計;

  • Campy-transtube 係針對分離糞便中彎曲桿菌(Campylobacter spp.)而設計。

此些攜送培養基的優點,以 Amies 及 Stuart 攜送培養基為例,說明如下

不含營養成分-微生物不會增殖。

為緩衝半固體瓊脂(buffer semi-solid agar)-除了使拭子維持濕度外,並可維持適當的 pH 值,使病原菌在攜送過程中不發生脫水、氧化和自我分解(autolysis)而死亡的現象。

含 sodium thioglycollate (硫代乙酸鹽)可做為還原劑

活性炭(若需要)-可去除有毒的代謝產物,但製作抹片較不方便觀察厚薄。


文章擷取:實用臨床微生物診斷學(蔡文城博士 編著)

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